微生物檢驗技術論文(2)

時間：2017-03-11 15:25:50 家文952由分享

微生物檢驗技術論文

　　微生物檢驗技術論文篇二

　　淺談空氣微生物的檢驗技術

　　摘要：目的：探討空氣微生物的檢驗措施。方法：通過實驗室的科學檢驗，掌握空氣微生物的屬性與致病因素，總結出系統的檢驗措施和相應的控制方法。結論：科學準確的掌握空氣微生物的檢驗措施，把握致病規律，才能為有效的控制和預防相關疾病提供可靠的依據。

　　關鍵詞：空氣微生物;檢驗;細菌

　　【中圖分類號】R446.5 【文獻標識碼】B 【文章編號】1672-8602(2014)01-0188-01

　　存在于空氣中的微生物。是主要的空中浮游生物。對較干燥環境和對紫外線具有抗性的種類，主要有附著于塵埃上的從地面飛起的球菌屬(包括八疊球菌屬在內的好氧菌);形成孢子的好氧性桿菌(如枯草芽孢桿菌);色串孢屬等野生酵母;青霉等霉菌的孢子等。下面將空氣微生物的檢驗技術分析匯報如下。

　　1各類微生物的基本檢驗程序

　　空氣中微生物檢驗主要分為細菌、病毒、真菌、立克次體類的檢驗。

　　2幾種常見空氣微生物采樣

　　方法及細菌菌落總數測定

　　2.1Andersen采樣器

　　2.1.1構造：新型采樣器是Andersenl958年研制而成由采樣膠體、流量劑、壓力計和抽氣泵組成。

　　2.1.2特點： ①采集空氣微粒范圍寬;

　　②采樣效率高;

　　③生物失活率低;

　　④敏感性高;

　　⑤操作簡便;

　　⑥應用范圍廣，常用于空氣致病微生物的采集。

　　2.1.3操作步驟：①消毒

　　采樣器的消毒方法有3種：75%酒精;高壓蒸氣滅菌：用于采樣頭的消毒;環氧乙烷消毒。

　　②有關參數設定：

　　流量，28.3L/min，固定流量抽吸空氣，流量準確與否是該采樣器操作的關鍵所在，流量不準或未經校正的采樣器不可使用。真空度，0.1354kPa。若真空度不夠，可影響氣流速度，從而影響采樣效率。

　　③平皿制備

　　采樣用培養基平皿要提前一天準備好，每個樣品需6個平皿，預置37℃18～24h培養，無細菌生長，即可用于采樣。

　　④采樣高度

　　根據采樣目的而定，一般置于人的呼吸帶高度，大約1.0～1.5m左右，并且采樣人員應遠離采樣頭。采集時間要根據現場微生物污染程度而定。

　　⑤培養

　　打開采樣器，蓋上平皿蓋。細菌培養37℃培養48h，真菌培養28℃培養72h。

　　⑥菌落計數：計數方法可以采用分段計數及菌落計數器進行。一般以菌落形成單位表示。一般每個平皿最多不超過250cfu。

　　2.2THK-201型采樣器

　　2.2.1構造： THK-201型采樣器是在JWL型采樣器基礎上改進而成。基本構成包括：采樣頭、流量計、抽氣泵、可調電路。

　　2.2.2特性： ①采樣頭的篩孔(隙)為可調式;

　　②捕獲率高;

　　③適應范圍廣，在不同環境通過調節篩孔來采集不同大小的微粒提高了其應用范圍，可采集細菌、真菌、病毒、立克次體、原生動物、植物、花粉、藻類等，適用于環保、生物工程、醫療衛生、衛生防疫、工農牧業、食品加工業等;

　　④功能齊全。

　　2.2.3操作步驟： ①平板制備

　　制作平皿培養基應注意厚薄均勻，保證無菌。瓊脂濃度要較其他采樣方法略高一點(≤2.4%)，過高過低均會影響采樣效率。

　　②儀器相關參數

　　電源，工作電壓：220V;轉速，選檔，定時范圍;流量，5～35L/min;采樣篩頭，最小狹縫≤20μm，最大500μm。根據需要分級調節，使用時要對環境中微生物有一個大略估計，以便進行篩孔調節。

　　③培養

　　方法和時間同Andersen采樣器。

　　2.3自然沉降采樣法

　　2.3.1特點：①簡便易操作，不需特殊采樣器，只需采樣的平皿培養基。

　　②能反映沉降細菌的數量，特別是醫院的燒傷外科、手術室、人流室等一些相對空氣流動性不大，但空氣中微生物在靜止時下落到物表，造成污染，更嚴重的造成院內感染。

　　③可用于粗略反映空氣中細菌污染狀況。

　　④此法不足之處：用下落菌推算空氣中懸浮菌量，有推理上的錯誤。比較公認的是奧梅梁斯基的公式來推算濃度，他認為在100cm2培養基表面，5min內能落下約10L空氣中所含菌量。標準細菌種類較少。采樣條件要保證無菌狀態，十分難以控制[1]。

　　2.3.2自然沉降法采樣的操作步驟：①培養基的制備：

　　一般采用9cm直徑平皿制作。細菌用普通營養瓊脂，真菌用沙堡培養基或察氏培養基。制備好的平板應置35～37℃預培養18～24h，選無菌生長的平皿用于采樣。

　　②選擇檢測點：

　　室內面積≤30m2沿一對角線上取三點，即中間一點兩端各距墻1m處各取一點，室內面積>30m2，設東、南、西、北、中5個點，各點均距墻1m，采樣高度0.8～1.5m。若使用采樣器監測時，采樣器應距地面高度33cm，離門窗及人員流動1m以上，且采樣器與采樣者要保持一定距離(50cm)，防止采樣者自身細菌被吸入采樣器而影響檢測結果。室外采樣要根據該地區氣象、交通、大氣污染程度、建筑物布局、有無樹林等進行合理選點，選點數不定，每個點采樣高度1.5m以上。可以一個點同時放置兩個平皿，以平均菌落數代表該點的菌落數。

　　③暴露平血時間：

　　原則是保證客觀反映采樣點情況，采樣后平皿中生長的菌落數要便于準確計數，太多以至于無法計數將造成較大偏差，一般潔凈室內暴皿時間可在5～30min，一般室內較潔凈的地方，多采用暴皿5min即可。

　　④培養：

　　細菌樣品35～37℃培養48h，真菌樣品置28℃培養72h。

　　2.4JWL型采樣器

　　2.4.1結構：由采樣頭、流量計、抽氣泵、電源電路4部分構成。

　　2.4.2特點： ①采樣的平皿可以轉動，使平皿上菌落均勻分布;

　　②交一直流兩用，應用簡便;

　　③自動按時采樣，可采細菌和病毒;

　　④但對空氣中占大多數的粒子捕獲率低。

　　2.4.3操作步驟： ①平皿制備

　　細菌用普通瓊脂，真菌用選擇性培養基(如察氏培養基)。平皿要求厚薄均勻，表面水平，加培養基量4.5ml，瓊脂濃度1.8%～2.4%為宜。